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堅(jiān)定的腳步范文第1篇

回到家，老媽又纏著我問(wèn)成績(jī)了，我搖了搖頭，她期望的目光也隨之變成了失望。她安慰我，打開了電視，讓我放松心情。在這時(shí)，我看到了劉德華演唱的北京殘奧會(huì)的歌。在其中，說(shuō)了一個(gè)普通的人在車禍中失去了一條腿，他知道自己失去了腿之后痛苦不堪，已經(jīng)失去了對(duì)生活的信心，但在十分激烈的思想斗爭(zhēng)后，他下定決心，要努力活下去，于是，他安了假肢，每天都練習(xí)跑步。剛開始，汗水在他的額頭上滲出，他每跑幾米后就摔倒，但他沒(méi)有氣餒，又爬了起來(lái)，頭上的汗在增多，但痛苦改變不了他堅(jiān)定的腳步，反而使他更堅(jiān)韌，更頑強(qiáng)。終于，在一次次摔倒之后，他成功地像正常人一樣地奔跑在路上、在跑道上、在他的人生路上。

看到這里，我心中頓時(shí)有一種莫名的感覺(jué)，是一種能帶給動(dòng)力的感覺(jué)，我想，在人生道路中，每一個(gè)人都會(huì)遇到自己的困難，這種困難只有自己才能夠去戰(zhàn)勝，在困難面前，我們應(yīng)學(xué)會(huì)挑戰(zhàn)困難，在失敗面前，我們更應(yīng)學(xué)會(huì)接受失敗，從哪里跌倒就從哪里爬起來(lái)。

在這次考試中，我雖然有較大的失誤，但是，如果我在挫折面前低頭，那將會(huì)導(dǎo)致我徹底的失敗。只有重整旗鼓，從現(xiàn)在做起，堅(jiān)定自己的腳步，才能不害怕失敗的打擊了。

堅(jiān)定的腳步范文第2篇

【關(guān)鍵詞】 股骨粗隆間骨折；不穩(wěn)定骨折；股骨近端防旋髓內(nèi)釘；動(dòng)力髖螺釘

股骨粗隆間不穩(wěn)定骨折多見(jiàn)于老年人和高能量損傷患者， 內(nèi)固定治療是目前主流的治療方法[1]。本科比較了PFNA及DHS內(nèi)固定治療的效果， 總結(jié)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 以2011年1月～2013年6月本科治療的股骨粗隆間不穩(wěn)定骨折患者66例為研究對(duì)象。其中男35例、女31例， 年齡22～68歲， 平均年齡（37.8±15.2）歲， 致傷原因：高處墜落傷12例、摔傷22例、暴力擊打傷19例、交通事故傷13例， AO/ASIF分型：A1型例23例、A2型29例、A3型14例。按照數(shù)字表法隨機(jī)分成對(duì)照組和觀察組各33例， 兩組患者在各方面比較， 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 有可比性。

1. 2 手術(shù)方法 對(duì)照組使用DHS內(nèi)固定治療：在C型臂X線下進(jìn)行閉合復(fù)位， 取股骨大粗隆頂點(diǎn)向下的切口， 利用135°導(dǎo)向器將導(dǎo)針向股骨頭穿入、效果滿意后， 利用適宜的DHS拉力螺釘和固定鋼板固定。觀察組使用PFNA內(nèi)固定治療：在C型臂X線下進(jìn)行閉合復(fù)位， 取大粗隆頂點(diǎn)向上的切口， 依據(jù)AO標(biāo)準(zhǔn)安放入主釘和螺旋刀片、進(jìn)行遠(yuǎn)端靜力或者動(dòng)力鎖定。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理相關(guān)的數(shù)據(jù)， 計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）形式表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）形式表示， 采用χ2檢驗(yàn)， P

2 結(jié)果

觀察組手術(shù)時(shí)間（75.8±15.2）min， 對(duì)照組手術(shù)時(shí)間（97.2± 18.3）min， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

3 討論

股骨粗隆間不穩(wěn)定骨折固定不佳極易造成髖內(nèi)翻、肢體短縮等并發(fā)癥的發(fā)生， 影響患者的活動(dòng)功能[2]。DHS內(nèi)固定屬于髓外固定的方式， 采用的是偏心性固定， 力學(xué)上需要承受較大的力矩， 抗旋轉(zhuǎn)力也差， 極易發(fā)生髓釘?shù)乃擅摵蛿嗔眩?尤其在股骨粗隆間不穩(wěn)定骨折患者固定效果更差， 發(fā)生髖內(nèi)翻的機(jī)率大大的升高。PFNA是一種改良的髓內(nèi)固定系統(tǒng)。研究認(rèn)為其具有獨(dú)特的技術(shù)優(yōu)勢(shì)[3]， 首先其貼合股骨解剖學(xué)形態(tài)的主釘設(shè)計(jì)利于準(zhǔn)確的將髓內(nèi)釘向股骨髓腔內(nèi)插入；其次螺旋形刀片的使用使其與松質(zhì)骨緊壓， 有效的防止刀片和股骨頭發(fā)生旋轉(zhuǎn)、降低丟失松質(zhì)骨， 從而發(fā)揮抗旋轉(zhuǎn)和穩(wěn)固的支撐的功效；最后其具備的定位裝置， 有助于手術(shù)的操作、降低手術(shù)時(shí)間、減少手術(shù)的創(chuàng)傷。本組研究中， 觀察組的手術(shù)時(shí)間、骨折愈合時(shí)間和并發(fā)癥的發(fā)生率均少于對(duì)照組， 術(shù)后Harris評(píng)分高于對(duì)照組， 與張令弘等[4]獲得相同的結(jié)論， 表明PFNA內(nèi)固定技術(shù)較DHS內(nèi)固定技術(shù)更利于股骨粗隆間不穩(wěn)定骨折的治療。

綜上所述， PFNA內(nèi)固定治療股骨粗隆間不穩(wěn)定骨折具有手術(shù)操作簡(jiǎn)單、利于骨折愈合、臨床效果佳和并發(fā)癥少的優(yōu)勢(shì)， 較DHS更適用于股骨粗隆間不穩(wěn)定骨折。

參考文獻(xiàn)

[1] 喻任， 倪誠(chéng)， 徐文停， 等.三種固定方式治療老年不穩(wěn)定性股骨粗隆間骨折的比較.生物骨科材料與臨床研究， 2013， 10（4）：37-39.

[2] 楊海林， 張杰， 董金波， 等.DHS與PFNA內(nèi)固定治療股骨粗隆間骨折的療效比較.中國(guó)骨與關(guān)節(jié)損傷雜志， 2013， 28（6）：553-554.

[3] 馮濤.Gamma-Ⅲ與PFNA釘治療不穩(wěn)定性股骨粗隆間骨折的對(duì)比研究.醫(yī)學(xué)綜述， 2013， 19（15）：2873-2875.

堅(jiān)定的腳步范文第3篇

關(guān)鍵詞：內(nèi)固定方法；股骨粗隆間骨折；住院時(shí)間；優(yōu)良率

股骨粗隆間骨折是臨床上常見(jiàn)的骨折疾病之一，發(fā)病人群以老年人為主，男性患者較女性偏多[1]。近幾年我國(guó)人口老齡化趨勢(shì)加快，越來(lái)越多人患有骨質(zhì)疏松，大大增加了各種骨折的發(fā)生率、手術(shù)治療是治療股骨粗隆間骨折的主要方式，各種手術(shù)的局限性與優(yōu)點(diǎn)不同，達(dá)到的臨床效果也不盡相同。

1資料與方法

1.1一般資料 選取2008年4月～2015年4月于我院治療的200例股骨粗隆間骨折患者作為研究對(duì)象，其中男性128例，女性72例；年齡44歲～95歲，平均（71.8±4.6）歲；根據(jù)Evans-Jensen分型標(biāo)準(zhǔn)判斷患者的骨折分型為：逆粗隆型6例，Ⅰb型25例，Ⅱa型31例，Ⅱb型98例，Ⅲ型40例；受傷原因：高處墜落傷5例，交通傷45例，摔傷138例，其他傷12例。所有患者隨機(jī)分為兩組，各100例。兩組患者一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05，可以進(jìn)行對(duì)比。

1.2治療方法 觀察組行Gamma釘內(nèi)固定治療。對(duì)患者行連續(xù)硬膜外麻醉，幫助其保持仰臥位，墊高患側(cè)，使之向健側(cè)傾斜15°。由股骨大粗隆近側(cè)入路，將臀中肌鈍性分離至股骨大粗隆頂點(diǎn)，于C型臂透視的輔助下復(fù)位骨折，將Gamma釘置入髖內(nèi)收位，并加以固定。

對(duì)照組行動(dòng)力髖螺釘（DHS）內(nèi)固定治療。對(duì)患者行連續(xù)硬膜外麻醉，幫助其保持仰臥位，墊高患側(cè)，使之向健側(cè)傾斜15°。由髖外側(cè)入路，在股外側(cè)肌后緣進(jìn)行剝離，使大粗隆與股骨上端顯露出來(lái)，于C型臂透視的輔助下復(fù)位骨折，將DHS置入其中，并加以固定。

1.3觀察指標(biāo) 記錄兩組患者的術(shù)中出血量、手術(shù)時(shí)間與住院時(shí)間，觀察其住院期間發(fā)生術(shù)后并發(fā)癥的情況，出院時(shí)應(yīng)用Harris髖關(guān)節(jié)創(chuàng)傷后功能評(píng)價(jià)對(duì)兩組患者術(shù)后髖關(guān)節(jié)功能恢復(fù)情況進(jìn)行評(píng)價(jià)，其中低于70分為差，70～79分為中，80～89分為良，90分及以上為優(yōu)，統(tǒng)計(jì)優(yōu)良率[2]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包SPSS130分析及處理相關(guān)數(shù)據(jù)，采用（x±s）的方式表示計(jì)量數(shù)據(jù)，用t檢驗(yàn)其組間比較，采用百分比的方式表示計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)，用？字2檢驗(yàn)。如果P

2結(jié)果

2.1兩組的手術(shù)及預(yù)后情況對(duì)比 經(jīng)過(guò)分析與統(tǒng)計(jì)，觀察組的術(shù)中出血量少于對(duì)照組，手術(shù)時(shí)間和住院時(shí)間短于對(duì)照組，差異顯著，P

2.2兩組的術(shù)后并發(fā)癥情況對(duì)比 觀察組術(shù)后發(fā)生髖內(nèi)翻2例，股骨粗隆間在骨折2例，并發(fā)癥發(fā)生率為4.0%；對(duì)照組術(shù)后發(fā)生傷肢短縮2例，螺釘穿出股骨頸3例，髖內(nèi)翻5例，并發(fā)癥發(fā)生率為10.0%，高于觀察組，差異顯著，P

2.3兩組的髖關(guān)節(jié)功能恢復(fù)情況對(duì)比 兩組患者術(shù)后髖關(guān)節(jié)恢復(fù)情況為：對(duì)照組差3例，中11例，良37例，優(yōu)49例，優(yōu)良率為86.0%；觀察組中5例，良38例，優(yōu)57例，優(yōu)良率為95.0%，高于對(duì)照組，差異顯著，P

3討論

股骨粗隆間骨折是臨床上一種常見(jiàn)的骨折疾病，大多為不穩(wěn)定骨折，且具有粉碎性。發(fā)病人群以老年人為主，身體機(jī)能衰退，免疫力低，一旦治療不及時(shí)，很可能殘留肢體縮短、髖內(nèi)翻等后遺癥。所以現(xiàn)階段國(guó)際上的學(xué)者均認(rèn)為發(fā)生股骨粗隆間骨折后需要盡早實(shí)施手術(shù)，這樣才能使內(nèi)固定更加堅(jiān)強(qiáng)，重建股骨近端的穩(wěn)定性與連續(xù)性，進(jìn)而使保守治療引起的并發(fā)癥減少，改善患者的關(guān)節(jié)功能[3]。

DHS內(nèi)固定系統(tǒng)主要是對(duì)股骨上端外側(cè)皮質(zhì)加以固定，發(fā)揮張力帶作用，持續(xù)對(duì)骨折端進(jìn)行動(dòng)態(tài)軸向加壓，使骨折斷面受到刺激后盡快愈合。這種內(nèi)固定方法可以滑動(dòng)加壓，具有固定牢固的優(yōu)點(diǎn)，然而若股骨不具備完整的內(nèi)側(cè)皮質(zhì)，應(yīng)力在內(nèi)側(cè)皮質(zhì)處集中時(shí)，就容易造成鋼板螺釘斷裂或者骨折畸形愈合。所以當(dāng)股骨粗隆間骨折穩(wěn)定或者相對(duì)穩(wěn)定時(shí)，適合應(yīng)用DHS，可以起到堅(jiān)強(qiáng)內(nèi)固定的目的，配合早期功能鍛煉，可獲得理想的臨床療效[4]。Gamma釘屬于髓內(nèi)固定，在擴(kuò)髓后的髓腔內(nèi)放置主釘，可以使骨距區(qū)壓應(yīng)力明顯減少，促進(jìn)骨折愈合。遠(yuǎn)端髓釘有預(yù)后股骨旋轉(zhuǎn)的作用，能夠增強(qiáng)固定的牢固性，同時(shí)還不會(huì)引起骨折縮短移位。與髓外固定相比，髓內(nèi)固定的手術(shù)及恢復(fù)時(shí)間均較短。本次研究中，觀察組的術(shù)中出血量少于對(duì)照組，手術(shù)時(shí)間和住院時(shí)間短于對(duì)照組，P

綜上所述，采用Gamma釘內(nèi)固定治療股骨粗隆間骨折，不僅手術(shù)創(chuàng)傷小、安全性高、術(shù)后關(guān)節(jié)功能恢復(fù)快，而且術(shù)后并發(fā)癥少。

參考文獻(xiàn)：

[1]趙洪普，徐秋玉，呂玉明，等.三種內(nèi)固定方法（PFNA、LPFP、DHS）治療老年股骨粗隆間骨折的比較[J].中國(guó)骨與關(guān)節(jié)損傷雜志，2012（6）：500-502.

[2]龐向華，歐陽(yáng)建江，周建飛，等.人工關(guān)節(jié)置換與內(nèi)固定治療骨質(zhì)疏松性不穩(wěn)定股骨粗隆間骨折的對(duì)比分析[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2013（10）：14-15.

堅(jiān)定的腳步范文第4篇

【關(guān)鍵詞】 人工關(guān)節(jié)置換；鎖定鋼板；不穩(wěn)定型股骨轉(zhuǎn)子間骨折

DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2016.13.032

股骨轉(zhuǎn)子間骨折好發(fā)于老年人， 死亡率達(dá)15%～20%[1]。目前治療方式以內(nèi)固定為主， 也有學(xué)者主張采用人工關(guān)節(jié)置換。兩種方法哪一種更優(yōu)越， 尚難定論。本文通過(guò)病例回顧， 比較分析人工關(guān)節(jié)置換與股骨近端鎖定鋼板治療老年不穩(wěn)定型股骨轉(zhuǎn)子間骨折的療效?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 回顧2012年1月～2014年2月本院收治不穩(wěn)定型股骨轉(zhuǎn)子間骨折67例， 其中男30例， 女37例。按Evans分型， Ⅲ型39例， Ⅳ型28例。左側(cè)40例， 右側(cè)27例，

全部為新鮮骨折。根據(jù)手術(shù)類型分為關(guān)節(jié)組34例， 年齡71～92歲， 平均年齡78.2歲， Evans分型Ⅲ型19例， Ⅳ型15例；均使用雙極人工股骨頭、骨水泥型固定， 其中30例合并內(nèi)科疾病。內(nèi)固定組33例， 年齡60～85 歲， 平均年齡74.8歲。

Evans分型Ⅲ型20例， Ⅳ型13例；均使用股骨近端解剖型鎖定鋼板， 28例合并內(nèi)科疾病。常見(jiàn)的內(nèi)科疾病有：高血壓病、冠心病糖尿病、慢性阻塞性肺疾病等。兩組患者年齡、性別、骨折分型等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 手術(shù)方法 內(nèi)固定組：于牽引床上行骨折閉合復(fù)位， 采用股骨外側(cè)入路， 顯露骨折斷端， 進(jìn)一步復(fù)位， 安放股骨近端鎖定鋼板， 克氏針經(jīng)鋼板近端小孔臨時(shí)固定， 然后在C臂透視下在股骨大轉(zhuǎn)子部以導(dǎo)向器引導(dǎo)鉆孔， 擰入鎖定螺釘3枚， 使轉(zhuǎn)子部螺釘呈多角度分布于股骨頸中。然后在骨折遠(yuǎn)端鉆孔擰入3枚鎖定螺釘， C臂證實(shí)位置良好， 關(guān)閉切口。

關(guān)節(jié)組：患者取健側(cè)臥位， 髖后外側(cè)入路， 切開關(guān)節(jié)囊， 于小轉(zhuǎn)子上1 cm處鋸斷股骨頸， 取出股骨頭， 量取股骨頭大小。整復(fù)骨折塊并用鋼絲綁扎固定。股骨髓腔逐級(jí)充分?jǐn)U髓， 調(diào)和并置入骨水泥， 插入股骨假體柄， 注意前傾角的角度。選擇合適大小的股骨頭安裝并復(fù)位。如果股骨矩粉碎或缺損難以復(fù)位， 則以骨水泥充填， 或以股骨頸皮質(zhì)骨植骨補(bǔ)缺。

1. 3 術(shù)后處理 術(shù)后3 d常規(guī)使用抗生素預(yù)防感染， 術(shù)后24～48 h拔除引流管， 常規(guī)兩周預(yù)防血栓治療。術(shù)后3 d行關(guān)節(jié)持續(xù)被動(dòng)運(yùn)動(dòng)（CPM）， 復(fù)查X片。關(guān)節(jié)組術(shù)后l周開始在助行器輔助下下地行走， 并逐漸負(fù)重， 而內(nèi)固定組4周后視骨折愈合情況及骨折穩(wěn)定性拄拐下地逐步負(fù)重。

1. 4 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 比較兩組手術(shù)時(shí)間、術(shù)中出血量、術(shù)后下地時(shí)間、圍手術(shù)期并發(fā)癥發(fā)生率及術(shù)后1、3、6個(gè)月Harris評(píng)分。按Harris評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)患者術(shù)后髖關(guān)節(jié)功能進(jìn)行評(píng)估。優(yōu)：90～100分；良：80～89分；可：70～79分；差：

1. 5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P

2 結(jié)果

2. 1 隨訪情況 住院期間無(wú)患者死亡， 術(shù)后1年死亡3例， 關(guān)節(jié)組2例， 鋼板組1例。關(guān)節(jié)組術(shù)后隨訪5～18 個(gè)月， 平均隨訪12.5 個(gè)月。內(nèi)固定組術(shù)后隨訪6～21個(gè)月， 平均隨訪14.3個(gè)月。

2. 2 手術(shù)情況 與內(nèi)固定組比較， 關(guān)節(jié)組手術(shù)時(shí)間較長(zhǎng)， 術(shù)中出血量較多， 下地時(shí)間較早（P

2. 3 術(shù)后關(guān)節(jié)功能 術(shù)后1、3個(gè)月關(guān)節(jié)組Harris評(píng)分顯著高于內(nèi)固定組（P0.05）。

2. 4 術(shù)后并發(fā)癥 內(nèi)固定組14例出現(xiàn)并發(fā)癥， 發(fā)生率為42.4%，

其中3例發(fā)生螺釘松動(dòng)、4例出現(xiàn)肺炎、2例出現(xiàn)深靜脈血栓、及心力衰竭3例、髖內(nèi)翻2例；關(guān)節(jié)組6例出現(xiàn)并發(fā)癥， 發(fā)生率為17.6%。其中肺炎3例、深靜脈血栓l例、假體周圍骨折2例。內(nèi)固定組并發(fā)癥發(fā)生率明顯高于關(guān)節(jié)組（P

3 討論

股骨轉(zhuǎn)子間骨折多發(fā)于老年人， 對(duì)于EvansⅠ、Ⅱ型穩(wěn)定型骨折， 多數(shù)學(xué)者認(rèn)為應(yīng)行內(nèi)固定術(shù)， 可選擇動(dòng)力髖螺釘（DHS）、防旋股骨近端髓內(nèi)釘（PFNA）等固定方式[2， 3]。對(duì)于逆行性轉(zhuǎn)子間骨折、不穩(wěn)定型、股骨外側(cè)壁不完整的轉(zhuǎn)子間骨折， 則應(yīng)選擇PFNA或股骨近端鎖定鋼板[4]。

股骨近端鎖定鋼板屬髓外固定系統(tǒng)， 因?yàn)槠浣欠€(wěn)定作用， 尤其適用于固定不穩(wěn)定型骨折。其優(yōu)越性在于：①鋼板與骨表面不強(qiáng)調(diào)完全貼附， 減少了骨膜的剝離， 更多保留了骨折端血供；②近端3枚螺釘成倒三角形植入股骨頸， 三者構(gòu)成三維結(jié)構(gòu)， 可將粉碎的骨塊拉攏固定， 維持穩(wěn)定性， 尤其適用于Ⅳ型轉(zhuǎn)子間骨折[5]。其缺點(diǎn)在于：①鎖定鋼板屬角穩(wěn)定， 非堅(jiān)強(qiáng)內(nèi)固定， 術(shù)后不宜早期負(fù)重活動(dòng)， 對(duì)患者下肢功能的恢復(fù)有所影響；②其抗張力強(qiáng)度較差， 術(shù)后易發(fā)生髖內(nèi)翻。本組下地時(shí)間明顯長(zhǎng)于關(guān)節(jié)組， 也突出反映了這個(gè)問(wèn)題。

國(guó)內(nèi)外研究表明， 人工關(guān)節(jié)置換術(shù)在縮短臥床時(shí)間， 改善生活質(zhì)量方面具有一定的優(yōu)勢(shì)[6]。本研究顯示， 關(guān)節(jié)組較內(nèi)固定組手術(shù)時(shí)間長(zhǎng)、出血量多， 考慮與關(guān)節(jié)置換手術(shù)軟組織剝離多， 擴(kuò)髓及骨水泥準(zhǔn)備耗時(shí)有關(guān)；而內(nèi)固定組有限切開， 組織剝離相對(duì)較少， 內(nèi)固定物植入過(guò)程耗時(shí)較少。但關(guān)節(jié)組術(shù)后下地明顯早， 術(shù)后1、3個(gè)月Harris評(píng)分明顯高于內(nèi)固定組， 且內(nèi)固定組并發(fā)癥發(fā)生率明顯高于關(guān)節(jié)組， 體現(xiàn)了人工關(guān)節(jié)的優(yōu)勢(shì)。

總之， 兩種方法治療老年不穩(wěn)定型股骨轉(zhuǎn)子間骨折各有優(yōu)缺， 人工關(guān)節(jié)置換雖不作為首選， 但對(duì)于高齡患者， 可以使患者在術(shù)后早期下床活動(dòng)， 減少并發(fā)癥， 有助于盡早恢復(fù)傷前狀態(tài)， 提高患者生活質(zhì)量， 減輕長(zhǎng)期臥床帶來(lái)的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)負(fù)擔(dān)。

參考文獻(xiàn)

[1] 王昌興， 姜滔， 沈建國(guó)， 等.人工股骨頭置換與動(dòng)力髖螺釘治療老年股骨轉(zhuǎn)子間骨折的對(duì)比研究.中華創(chuàng)傷雜志， 2009， 25（5）：418-421.

[2] Ostermann PA， Haase N， Ekkernkamp N. Techniques of extrame-dullary osteosynthesis in proximal femoral fractures. Der Chirurg， 2001， 72（11）：1271-1276.

[3] 錢忠來(lái)， 徐耀增， 王現(xiàn)彬， 等.動(dòng)力髖螺釘、股骨近端防旋髓內(nèi)釘和第3代Gamma釘置入內(nèi)固定后生物力學(xué)性能與臨床效果的比較.中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)， 2010， 14（48）： 8974-8979.

[4] 苗旭漫， 南軍， 石偉， 等. 滑動(dòng)加壓股骨粗隆間骨折外固定器的設(shè)計(jì)和臨床應(yīng)用. 中國(guó)骨與關(guān)節(jié)損傷雜志， 2007， 22（1）：13-15.

[5] 鄒明， 柏廣富， 張焱， 等. 三種不同內(nèi)植物固定治療老年股骨轉(zhuǎn)子間骨折. 中國(guó)組織工程研究， 2012， 16（30）：5696-5700.

堅(jiān)定的腳步范文第5篇

[關(guān)鍵詞] 代謝組學(xué)； 磁共振； 假絲酵母菌； 主成分分析

[中圖分類號(hào)] R 739.86 [文獻(xiàn)標(biāo)志碼] A [doi] 10.7518/hxkq.2013.03.018

白色假絲酵母菌、熱帶假絲酵母菌、光滑假絲酵母菌是正常人口腔、胃腸道、呼吸道及陰道黏膜的常見(jiàn)共生菌，僅能在特定條件下造成宿主感染。代謝組學(xué)是20世紀(jì)90年代中期發(fā)展起來(lái)的一門對(duì)生物體或細(xì)胞的所有低相對(duì)分子質(zhì)量代謝產(chǎn)物進(jìn)行定量和定性分析的新技術(shù)。高分辨率磁共振（nuclear ma-

gnetic resonance，NMR）可用于對(duì)細(xì)胞外微量代謝組分進(jìn)行檢測(cè)，得到相應(yīng)的代謝圖譜，使用先進(jìn)的軟件分析方法可以正確地歸類處理這些圖譜。本研究對(duì)與口腔黏膜病相關(guān)的3種假絲酵母菌的代謝圖譜進(jìn)行比較，用主成分分析法（principal components ana-lysis，PCA）進(jìn)行分析，探討用該方法尋找特征性產(chǎn)物來(lái)鑒定假絲酵母菌的可行性。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)菌株及實(shí)驗(yàn)儀器

白色假絲酵母菌ATCC 10231、熱帶假絲酵母菌

ATCC 13803、光滑假絲酵母菌ATCC 15126（上海川翔生物科技有限公司）；CH-2生物顯微鏡（Olympus公司，日本），分光光度計(jì)（上海尤尼卡公司），高

速低溫離心機(jī)（Jouan公司，法國(guó)），-80 ℃低溫冰箱（Heto Ultra公司，美國(guó)），磁共振儀（Bruker公司，德國(guó)）；重水（上海楚柏實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司）；分析軟

件SIMCA-P 11.0（Umea公司，瑞典）。

1.2 生長(zhǎng)曲線的繪制

將白色假絲酵母菌、熱帶假絲酵母菌、光滑假絲酵母菌解凍，增菌48 h，經(jīng)顯微鏡形態(tài)學(xué)檢查及科瑪嘉顯色培養(yǎng)基鑒定為純培養(yǎng)后，分別將3種假絲酵母菌接種于沙保培養(yǎng)基，培養(yǎng)48 h，用分光光度計(jì)調(diào)整菌懸液吸光度值為1.00±0.05備用。在9支試管中分別加入沙保培養(yǎng)液4.5 mL，在每支試管中加入白色假絲酵母菌菌懸液50 μL，同法將熱帶假絲酵母菌及光滑假絲酵母菌菌懸液50 μL分別加入9支試管中，各試管在37 ℃、200 r·min-1搖床行增菌培養(yǎng)，在3、6、9、12、24、36、48、60、72 h各取1支，旋渦振蕩器混勻30 s，分光光度計(jì)測(cè)量菌懸液吸光度值，以純沙保培養(yǎng)液作陰性調(diào)零，測(cè)定3種假絲酵母菌的菌懸液密度。將實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的平均值，以時(shí)間（h）為橫坐標(biāo)，以O(shè)D600值為縱坐標(biāo)繪制生長(zhǎng)曲線。

1.3 測(cè)試樣本的制備

分別取3種假絲酵母菌生長(zhǎng)穩(wěn)定期（培養(yǎng)36 h）的培養(yǎng)液于4 ℃、10 000 r·min-1離心10 min，吸取上清液1 mL，加0.5 mL磷酸鹽緩沖液（2.4 g·L-1 KH2PO4，

8 g·L-1 Na2HPO4，7.2 g·L-1 NaCl），混勻后靜置10 min，以相同條件（4 ℃、10 000 r·min-1）離心10 min，吸取上清液用0.22 μm濾紙過(guò)濾，取1.35 mL濾液，加入重水0.15 mL，混勻后將樣品移入核磁管中（每管1.5 mL），置于-80 ℃低溫冰箱保存，NMR測(cè)定前解凍并保持在0 ℃左右。

1.4 1H-NMR圖譜的采集和處理

將核磁管放入磁共振儀中進(jìn)行1H-NMR譜掃描，樣本的掃描溫度設(shè)置為295 K室溫。采用磁共振儀專用參數(shù)，包括采集點(diǎn)數(shù)32×1 024，累加次數(shù)128次，每個(gè)樣本掃描后均收集到131 072個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)，波寬為7 788.162 11 Hz，每個(gè)樣本掃描2～3 min，將得到的15個(gè)原始的自由感應(yīng)衰減信號(hào)（free induction decay，

FID）輸入MestReC軟件進(jìn)行傅里葉轉(zhuǎn)換（Fourier tran-sition，F(xiàn)T），并進(jìn)行相位調(diào)整和基線調(diào)整，獲得相位滿意、基線平整的1H-NMR圖譜。調(diào)用軟件的積分工具，除去水峰所在區(qū)間，并對(duì)1H-NMR譜進(jìn)行分段積分，其中每個(gè)FID信號(hào)有200個(gè)積分值。將每個(gè)樣本的積分值導(dǎo)入Excel表中備用。

1.5 數(shù)據(jù)分析

用PCA進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。用SIMCA-P 11.0軟件對(duì)200個(gè)積分值進(jìn)行化學(xué)計(jì)量上的處理，以主成分矢量為坐標(biāo)軸作二維圖，即得分圖，從而對(duì)不同的菌懸液進(jìn)行分析，找出類別間的差異所在。

2 結(jié)果

2.1 3種細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線

3種假絲酵母菌的生長(zhǎng)曲線見(jiàn)圖1。由圖1可見(jiàn)，3種菌的生長(zhǎng)規(guī)律相似，36～48 h生長(zhǎng)繁殖達(dá)到高峰，處于穩(wěn)定期，48 h后處于衰亡期。選擇生長(zhǎng)穩(wěn)定期（36 h）的代謝物測(cè)1H-NMR圖譜。

2.2 1H-NMR圖譜的測(cè)定結(jié)果

圖2為白色假絲酵母菌、熱帶假絲酵母菌和光滑假絲酵母菌的1H-NMR圖譜，3種菌的氫譜輪廓相似，其代謝物集中在化學(xué)位移值為3.5×10-6和1.0×10-6附近，每種菌代謝物集中出現(xiàn)區(qū)域的波譜形態(tài)與強(qiáng)度并不完全一樣，但通過(guò)單純的1H-NMR圖譜無(wú)法清楚準(zhǔn)確地區(qū)分3種菌。

2.3 PCA結(jié)果

以不同假絲酵母菌代謝物主成分矢量為坐標(biāo)軸做出的PCA得分圖見(jiàn)圖3～5，可見(jiàn)不同數(shù)據(jù)有組間離散、同類數(shù)據(jù)有組內(nèi)聚集的特點(diǎn)。白色假絲酵母菌散點(diǎn)圖內(nèi)部有較好的聚集，與熱帶假絲酵母菌的得分圖沒(méi)有混雜（圖3）。白色假絲酵母菌相對(duì)于光滑假絲酵母菌的散點(diǎn)圖團(tuán)聚性更好，可以很好地與光滑假絲酵母菌區(qū)分開，且散點(diǎn)圖均位于95%的可信區(qū)間內(nèi)（圖4）。熱帶假絲酵母菌與光滑假絲酵母菌各自

的團(tuán)聚性很好，不同細(xì)菌沒(méi)有混雜（圖5）。

3 討論

近年來(lái)，隨著廣譜抗生素的濫用，腎上腺皮質(zhì)激素、細(xì)胞毒性藥物和放射治療的廣泛應(yīng)用，口腔假絲酵母菌性損害日益增多。Shen等[1]在研究中國(guó)老

年人根面齲細(xì)菌學(xué)時(shí)指出，白色假絲酵母菌檢出率高達(dá)63.33%。Gbris等[2]認(rèn)為，白色假絲酵母菌是齲病的危險(xiǎn)因素之一，其數(shù)量與齲有很強(qiáng)的相關(guān)性。由此可見(jiàn)，分離和快速鑒定假絲酵母菌有很重要的臨床意義。在假絲酵母菌性損害中，最常見(jiàn)的是白色假絲酵母菌，其毒力最強(qiáng)。近年來(lái)光滑假絲酵母菌檢出率也逐漸增高，且對(duì)氟康唑等抗真菌藥物并不敏感，需要在臨床中加以區(qū)分，以選擇不同的治療方案。本實(shí)驗(yàn)采用代謝組學(xué)鑒定法對(duì)3種假絲酵母菌進(jìn)行分析鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：基于NMR的代謝組學(xué)及一系列化學(xué)計(jì)量學(xué)和多元統(tǒng)計(jì)學(xué)方法可以區(qū)分不同的假絲酵母菌。

近年來(lái)，代謝組學(xué)在疾病診斷，植物、微生物研究中均有大量的文獻(xiàn)出現(xiàn)。作為一門研究生物體內(nèi)源性代謝物整體及其變化規(guī)律的學(xué)科，代謝組學(xué)實(shí)際上是分析化學(xué)、化學(xué)計(jì)量學(xué)和生命科學(xué)的交叉學(xué)科。它利用了分析化學(xué)的各種譜學(xué)技術(shù)，包括磁共振波譜、質(zhì)譜、色譜、紅外和拉曼光譜等進(jìn)行研究。本研究的方法是常用的磁共振波譜，通過(guò)磁共振波譜獲得海量、多維的數(shù)據(jù)后進(jìn)行正確的分析是本研究的關(guān)鍵步驟。

PCA是最常用的分析方法，是將分散于一組變量上的信息集中于幾個(gè)綜合指標(biāo)上，發(fā)揮了數(shù)據(jù)降維分析的作用，避免淹沒(méi)于大量數(shù)據(jù)中[3]。從PCA得分圖可觀察樣品的集聚或離散程度。樣品分布點(diǎn)越靠近，說(shuō)明這些樣品中所含有的變量和/或分子的組成和濃度越接近；反之，樣品分布點(diǎn)越遠(yuǎn)離，其差異越大；因此，得分圖也可以更形象地稱為樣品分布散點(diǎn)圖。本實(shí)驗(yàn)中，3張散點(diǎn)圖中不同的細(xì)菌無(wú)交叉，同一細(xì)菌間有聚集趨勢(shì)。在光滑假絲酵母菌與熱帶假絲酵母菌的散點(diǎn)圖中，數(shù)據(jù)呈現(xiàn)出很好的團(tuán)聚性。PCA也存在一些問(wèn)題，由于實(shí)驗(yàn)的操作因素或樣本本身的原因經(jīng)常會(huì)有離群樣本點(diǎn)存在，這會(huì)嚴(yán)重影響聚類結(jié)果[4]和生物標(biāo)志物的尋找結(jié)果。此

外，同一細(xì)菌的不同代謝物可能有較明顯的尺度差異，主成分的選擇會(huì)受到濃度較大組分的影響[5]，一

些濃度小的代謝組分的影響通常體現(xiàn)不出來(lái)，而這些小濃度組分往往有很重要的生物學(xué)意義。本實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，在同一張散點(diǎn)圖中，光滑假絲酵母菌相對(duì)于白色假絲酵母菌的散點(diǎn)圖更加分散。在后續(xù)的研

究中，筆者認(rèn)為，應(yīng)該摸索如何用尺度同一化的方法進(jìn)行數(shù)據(jù)預(yù)處理來(lái)消除數(shù)據(jù)的尺度差異。

經(jīng)典的微生物分類方法多根據(jù)微生物形態(tài)學(xué)以及對(duì)不同底物的代謝情況進(jìn)行表型分類。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，基因型分類法得到了廣泛應(yīng)用，但是，某些菌株按照表型與基因型兩種方法分類時(shí)會(huì)得出不同的結(jié)果。在這種情況下，代謝譜分析法逐漸成為一種快速、高通量、全面的表型分類方法[6]。該方法可通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞外代謝物進(jìn)行鑒別，與現(xiàn)有其他細(xì)菌鑒定方法相比較，基于NMR的代謝組學(xué)技術(shù)具有樣品處理簡(jiǎn)單、用量少（只需10 mg）、測(cè)定快

速（只需5 min）、無(wú)侵入性、不破壞樣品的結(jié)構(gòu)性質(zhì)

等優(yōu)點(diǎn)，可作為常規(guī)細(xì)菌鑒定分類方法的有益補(bǔ)充。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Shen S， Samaranayake LP， Yip HK， et al. Bacterial and yeast flora

of root surface caries in elderly， ethnic Chinese[J]. Oral Dis， 2002，

8（4）：207-217.

[2] Gbris K， Nyrasdy I， Bnóczy J. Significance of assessing risk

factors for caries in their prevention[J]. Orv Hetil， 2002， 143（24）：

1467-1473.

[3] Waters NJ， Holmes E， Waterfield CJ， et al. NMR and pattern re-

cognition studies on liver extracts and intact livers from rats treated

with alpha-naphthylisothiocyanate[J]. Biochem Pharmacol， 2002， 64

（1）：67-77.

[4] Nicholson JK， Connelly J， Lindon JC， et al. Metabonomics： A plat-

form for studying drug toxicity and gene function[J]. Nat Rev Drug

Discov， 2002， 1（2）：153-161.

[5] Urbanczyk-Wochniak E， Luedemann A， Kopka J， et al. Parallel

analysis of transcript and metabolic profiles： A new approach in

systems biology[J]. EMBO Rep， 2003， 4（10）：989-993.

[6] Bundy JG， Willey TL， Castell RS， et al. Discrimination of patho-

genic clinical isolates and laboratory strains of Bacillus cereus by