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【摘要】［目的］觀察動物天麻鎮(zhèn)眩顆粒的急性毒性和長期毒性。［方法］以最大可灌濃度、最大體積的天麻鎮(zhèn)眩顆粒溶液1d內(nèi)灌服小鼠1次，測定最大耐受量，并推算出相當(dāng)臨床人用量的倍數(shù)。以高、中、低劑量的天麻鎮(zhèn)眩顆粒溶液經(jīng)胃灌服大鼠，連續(xù)12周。觀察大鼠的生長發(fā)育、血液學(xué)、生化學(xué)、心肝腎功能、臟器系數(shù)、組織病理變化及停藥2周后，上述指標(biāo)的變化。［結(jié)果］小鼠1d內(nèi)1次經(jīng)胃灌服受試物的最大耐受量＞140g/kg。長期毒性試驗高劑量組雌性大鼠用藥第5周出現(xiàn)脫毛，2周后恢復(fù)。高劑量組大鼠給藥后24h血小板、白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞高于對照組，統(tǒng)計結(jié)果有顯著性差異，停藥后2周以上三項恢復(fù)，與對照組比較未見顯著性差異。［結(jié)論］天麻鎮(zhèn)眩顆粒對血液學(xué)的影響是可逆的，連續(xù)口服給藥較安全。

【關(guān)鍵詞】天麻鎮(zhèn)眩顆粒；急性毒性試驗；慢性毒性試驗

Abstract：［Objective］ToobservetheacuteandchronictoxicityofTianmazhenxuanGranules.［Method］Oralmaximaltolerancedose(MTD)wasdeterminedformice.Thechronictoxicitywasperformedinrats,thetreatmentgroups(large,middle,smalldoseofTianmazhenxuanGranules)andcontrolgroupweremade.Aftercontinuouslyfeedingratsorallyfor12weeks,weobservedtherats′appearance,behavior,blood,organcoefficientandpathologicchangesoforgan.Theabovephysiologicalsignswereinspectedagain2weeksafterceaseoffeeding.［Result］MTD＞140g·kg-1.Inthechronictoxicityexperiment，thehairoffemaleratsinlargedoseshedatthe5thweekofadministration,butafter2weekstheyallrecovered.24hoursafterfeeding,therats′platelet,whitebloodandlymphcellofhighdosegroupwerehigherthancontrolgroup,andhadremarkabledifferenceinstatistics.2weeksafterceaseoffeeding,paredwiththecontrolgroup,therewasnoremarkabledifferenceinstatistics.［Conclusion］ThepresentstudiesshowthatitissafetotakeTianmazhenxuanGranulesforadministration.

Keywords：TianmazhenxuanGranules；acutetoxicity；chronictoxicitytest

天麻鎮(zhèn)眩顆粒是在陳寶田教授的經(jīng)驗方――鎮(zhèn)眩湯基礎(chǔ)上加天麻，用科學(xué)的方法提取有效成分經(jīng)特殊工藝精制而成的純中藥復(fù)方制劑，處方符合中醫(yī)標(biāo)本兼治、辨證施治的理論，有較好的臨床基礎(chǔ)。天麻鎮(zhèn)眩顆粒具有健脾利濕，養(yǎng)血活血，祛痰定眩，平肝潛陽等功用，臨床上用于治療耳源性眩暈，即現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的美尼爾氏綜合征，屬于中醫(yī)的“眩暈”范疇。毒理學(xué)研究是新藥進入臨床前必不可少的環(huán)節(jié),為新藥的安全性提供了依據(jù),現(xiàn)將其毒理學(xué)研究結(jié)果報告如下。

1材料

1.1藥物天麻鎮(zhèn)眩顆粒，4g生藥/g顆粒，由南方醫(yī)院制藥廠提供，批號：20060809。實驗前用負(fù)離子水配成87.5％、43.8％、21.9％濃度的溶液，置4℃冰箱保存?zhèn)溆?，實驗時采用不同濃度等體積灌胃給藥。

1.2動物昆明小鼠40只，體重20±2g,雌雄各半。實驗動物合格證號：0016417。Wistar大鼠80只，體重90～120g，鼠齡6～8周，雌雄各半。實驗動物合格證號：0016556。以上動物均由南方醫(yī)科大學(xué)動物中心提供。

2方法［1］

2.1小鼠急性毒性試驗根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果，未測出天麻鎮(zhèn)眩顆粒LD50，因此只做最大給藥量試驗。40只小鼠隨機分成2組，即天麻鎮(zhèn)眩顆粒組和空白對照組，每組20只，雌雄各半。禁食、不禁水12h后，天麻鎮(zhèn)眩顆粒組以87.5%濃度，0.8ml/20g體積（最大允許容量、最大可灌濃度）經(jīng)胃一次性灌服天麻鎮(zhèn)眩顆粒溶液,劑量為35g/kg(相當(dāng)于生藥140g/kg)?？瞻讓φ战M給予等容積負(fù)離子水。給藥當(dāng)日，嚴(yán)密觀察小鼠外觀、行為活動、呼吸、分泌物、排便、死亡等情況，常規(guī)飼養(yǎng)并觀察7d，稱取體重，記錄死亡及毒副反應(yīng)癥狀。試驗結(jié)束時，將全部動物處死、解剖，肉眼檢查各主要臟器組織病變情況，計算最大耐受量，并記錄結(jié)果。

2.2長期毒性試驗Wistar大鼠80只，隨機分成天麻鎮(zhèn)眩顆粒高、中、低劑量組及對照組4組，每組雌雄各10只，試驗前觀察1周。受試藥物按60kg成人每天服用180g等效換算，高、中、低劑量組分別等效于成年人用量的40、20、10倍，即分別為0.68g/kg、1.35g/kg、2.7g/kg（相當(dāng)于生藥2.7g/kg、5.4g/kg、10.8g/kg），給藥體積均為3ml/kg。連續(xù)給藥12周，每日上午給藥，每2周稱量記錄體重一次，并適時調(diào)整給藥劑量。試驗期間逐日記錄消耗的飼料重量、大鼠外觀、行為、分泌物、排泄物、死亡情況及中毒反應(yīng)（中毒反應(yīng)的癥狀、嚴(yán)重程度、起始時間、持續(xù)時間、是否可逆）等。最后一次給藥后24h每組處死10只大鼠（雌雄各半）檢測血液學(xué)包括紅細(xì)胞（RBC）、血紅蛋白(Hb)、血小板(PLT)、白(WBC)細(xì)胞及其分類，心肝腎功能包括尿素氮（BUN）、肌酐（CR）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、肌酸激酶（CK），生化學(xué)包括鉀（K）、鈉（Na）、氯（Cl）、總蛋白（TP）、葡萄糖（GLU）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（CHOL），并進行系統(tǒng)尸解，秤取臟器重量包括心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、腦、胸腺、睪丸、附睪、卵巢、子宮，計算臟器系數(shù)，肉眼觀察病理變化，并將各臟器、組織石蠟包埋、切片、鏡下觀察病理變化。每組留下10只大鼠（雌雄各半）繼續(xù)觀察2周，再處死檢查以上各指標(biāo)。

3結(jié)果

3.1急性毒性試驗結(jié)果天麻鎮(zhèn)眩顆粒以87.5％濃度，0.8ml/20g體積1d1次經(jīng)胃灌服給藥后觀察7d，小鼠外觀、行為活動、進食進水、呼吸、分泌物、排便未見異常，未有小鼠死亡。給藥前給藥組與對照組體重（g）分別為26.05±3.22、24.50±2.76，給藥后第8天給藥組與對照組體重（g）分別為30.45±4.40、27.60±3.03，組間比較無顯著性差異。肉眼尸檢心、肝、脾、肺、腎、胃腸等主要臟器組織未見明顯異常。測得最大耐受量≥140g/kg，此劑量是臨床成人（以60kg計算）每日口服劑量3g/kg的47倍。

3.2長期毒性試驗結(jié)果

3.2.1對大鼠一般行為及體重的影響用藥第5周高劑量組雌性大鼠出現(xiàn)脫毛現(xiàn)象，2周后毛發(fā)恢復(fù)正常。其余各組一般體征、外觀、進食進水、分泌物、排便等與對照組比較未見明顯異常。高、中、低劑量各組給藥后24h與停藥后兩周體重增長與對照組比較無顯著性差異。具體結(jié)果見表1。

表1天麻鎮(zhèn)眩顆粒給藥不同時間對大鼠體重增長的影響（略）

以上各組與對照組比較，P＞0.05

3.2.2對大鼠臟器系數(shù)的影響高、中、低劑量組各臟器系數(shù)在給藥后24h及停藥后2周與對照組比較均未見顯著性差異。結(jié)果見表2。

表2天麻鎮(zhèn)眩顆粒對大鼠主要臟器系數(shù)的影響（略）

以上各組與對照組比較，P＞0.05

3.2.3對大鼠血液學(xué)影響：高劑量組大鼠給藥后24小時血小板、白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞高于對照組，統(tǒng)計結(jié)果有顯著性差異，停藥后2周以上三項恢復(fù)正常，與對照組比較未見顯著性差異。中劑量組與低劑量組給藥后24h與停藥后2周的血液學(xué)指標(biāo)與對照組比較均無顯著性差異。結(jié)果見表3。

表3天麻鎮(zhèn)眩顆粒對大鼠血液學(xué)的影響（略）

與對照組比較，**P＜0.01，*P＜0.05，其余數(shù)據(jù)P＞0.05

3.2.4對大鼠心肝腎功能影響高中低劑量組給藥后24h與停藥后2周心肝腎功能指標(biāo)與對照組比較均無顯著性差異。結(jié)果見表4。

表4天麻鎮(zhèn)眩顆粒對大鼠心肝腎功能的影響（略）

以上各組與對照組比較P＞0.05

3.2.5對大鼠血液生化影響高中低劑量組給藥后24h與停藥后2周血液生化指標(biāo)與對照組比較均無顯著性差異。結(jié)果見表5。

表5天麻鎮(zhèn)眩顆粒對大鼠血液生化的影響（略）

以上各組與對照組比較P＞0.05

3.2.6對Wistar大鼠重要臟器的病理剖檢及組織學(xué)鏡檢結(jié)果P連續(xù)灌服受試樣品12周后，處死大鼠，作病理學(xué)剖檢內(nèi)臟并進行觀察，結(jié)果描述如下。（1）頭顱：顱骨無畸形，軟硬腦膜、腦垂體無異常，腦溝和腦回深淺正常，腦室結(jié)構(gòu)清楚。（2）心：心外膜光滑，無出血點，心肌厚薄及色澤未見異常，未見心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)壞死或疤痕，心瓣膜厚薄正常，腱索未見粘連，心內(nèi)膜光滑，冠脈未見狹窄或硬化。（3）肝：色澤暗紅，表而光滑潤澤，肝小葉結(jié)構(gòu)清楚，門靜脈區(qū)無變化，未見主要靜脈擴張，膽道內(nèi)無結(jié)石，膽管腔形態(tài)正常。（4）肺：左右兩肺大小、硬度、色澤均正常，切而輪廓整齊明確，未見肺褐色硬變，未見支氣管、血管異常變化。（5）脾：硬度色澤均正常，切而輪廓整齊明確，未見異常變化。（6）腎：左右腎大小及硬度色澤均正常，切而光滑，未見包膜粘連，切面皮、髓質(zhì)交界明確，皮層條紋清楚，輸尿管內(nèi)未見結(jié)石，腎動脈壁未見異常。（7）睪丸：大小、質(zhì)量及硬度均正常，睪丸曲精小管具彈性(可用鑷子拉引出來)，附睪、精束和尿道口未見異常。（8）子宮及卵巢：子宮位置、大小、形狀等均未見異常；未見輸卵管與鄰近臟器粘連，腔內(nèi)未見阻塞，卵巢大小正常，兩側(cè)對稱，色澤正常。

上述組織塊作常規(guī)組織學(xué)固定、切片、染色，光學(xué)顯微鏡下觀察，結(jié)果如下：（1）心肌纖維結(jié)構(gòu)清楚，未見心肌變性、壞死、水腫或炎變，未見疤痕;未見粘液或纖維樣變性，未見風(fēng)濕小結(jié);瓣膜亦未見粘液水腫，未見灶性細(xì)胞壞死性或炎性細(xì)胞浸潤，未見肉牙等組織形成或膠原纖維增生等現(xiàn)象。（2）肝細(xì)胞輪郭及內(nèi)部結(jié)構(gòu)清晰，未見細(xì)胞膨脹及炎性細(xì)胞浸潤。（3）肺未見肺泡膨脹，間隔變窄，間孔變大等現(xiàn)象，未見小支氣管炎性病變或炎性細(xì)胞浸潤；未見肺泡壁毛細(xì)管擴張充血水腫或肺泡內(nèi)充滿滲出物。（4）腎包膜正常無粘連，腎皮質(zhì)與髓質(zhì)分界清楚，腎盞腎盂大小正常，未見腎小球上皮細(xì)胞增生或脂變、腫脹；未見腎組織破壞、充血、水腫或炎性細(xì)胞浸潤。（5）睪丸細(xì)胞排列正常;結(jié)構(gòu)未見異常；未見器質(zhì)性病變或炎癥。（6）子宮未見腺上皮過度增殖，未見絨毛間質(zhì)高度水腫或絨毛間質(zhì)內(nèi)血管消失，未見滋養(yǎng)層上皮細(xì)胞高度增生。（7）卵巢皮質(zhì)髓質(zhì)結(jié)構(gòu)清楚，未見組變性或炎變，未見卵巢囊腫或?qū)嵸|(zhì)瘤。

以上剖檢觀察及病理學(xué)鏡檢表明，受試樣品天麻鎮(zhèn)眩顆粒高劑量組和空白對照組大鼠的主要臟器沒有發(fā)現(xiàn)有毒性反應(yīng)及病理性損害的改變。

4討論

天麻鎮(zhèn)眩顆粒的初步藥效學(xué)研究結(jié)果證明其有鎮(zhèn)靜、催眠、利尿、鎮(zhèn)吐等藥理作用［2］。為了對天麻鎮(zhèn)眩顆粒的安全性做出科學(xué)的評價，為臨床試驗用藥提供科學(xué)的依據(jù)，保證臨床用藥安全，天麻鎮(zhèn)眩顆粒在臨床試驗前進行動物毒理學(xué)研究必不可少［3］。急性毒性試驗結(jié)果表明小鼠1d1次經(jīng)胃灌服天麻鎮(zhèn)眩顆粒溶液外觀、行為活動、進食進水、呼吸、分泌物、排便未見異常，未有小鼠死亡。測得最大耐受量≥140g/kg，此劑量是臨床成人（以60kg計算）每日口服劑量3g/kg的47倍。長期毒性試驗高劑量組雌性大鼠用藥第5周出現(xiàn)脫毛，2周后毛發(fā)又長出，說明脫毛現(xiàn)象可恢復(fù)。高劑量組大鼠給藥后24h血小板、白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞高于對照組，統(tǒng)計結(jié)果有顯著性差異，停藥后2周以上三項恢復(fù)正常，與對照組比較未見顯著性差異，說明天麻鎮(zhèn)眩顆粒對血液學(xué)的影響是可逆的。其余各項指標(biāo)高、中、低各組與對照組比較均未見顯著性差異。對大鼠重要臟器的剖檢及組織學(xué)鏡檢未發(fā)現(xiàn)有病理性改變，提示在上述實驗條件下，天麻鎮(zhèn)眩顆粒無明顯毒副作用，服用安全。

【參考文獻】

［1］陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1996.

［2］國家藥品監(jiān)督管理局.中藥新藥研究的技術(shù)要求（五：毒理研究）［S］.1999：2425.

［3］崔桂梅，陳寶田，胡瓊力.天麻鎮(zhèn)眩顆粒的鎮(zhèn)靜催眠作用［J］.廣東醫(yī)學(xué)，2007，28（10）：1599.